1、什么是血浆游离DNA？

血浆游离DNA，是指血液中游离于细胞外的DNA，其来源主要有三：白细胞崩解释放的DNA、坏死组织特别是肿瘤组织释放入血液的DNA和感染病毒、细菌的DNA。目前，游离DNA已作为新的生物标志物用于临床孕妇产前诊断、肿瘤检测、器官移植术后排斥和感染检测等领域。

2、如何选择血浆游离DNA的提取试剂？

血液中游离DNA含量一般较低，片段较小，不易提取，这大大影响了游离核酸的基因检测和各种研究的开展。一个合适的血浆游离DNA提取试剂需要操作简单、富集性能好、纯度高、产量大等特点。如果目标基因丰度较低，需要较多的血浆进行富集提取，则需要选择专门的血浆DNA富集提取试剂。

血清、血浆样本中游离核酸含量较低，根据Qiagen公司数据，1mL血浆样本DNA提取得率只有7.35ng左右（图1）。这么低的核酸浓度，如果直接用紫外法检测，得出的数值并不准确，而且多次测量的结果会变异很大。有些研究者提取血浆核酸后习惯于先用紫外检测浓度，发现紫外检测不出来或浓度很低时便认为提取失败，放弃后面进一步的实验，其实并不可取。我们可以把紫外读数作为参考，但是不能作为判断得率的唯一标准，最好还是要做个PCR或荧光定量。根据Qiagen公司的实验，血浆的量与提取的核酸量成正比。因而，如果要提高核酸得率，可通过增加血浆的量来实现。一般地，做血浆核酸提取，样本量最好在1mL以上。如果1mL或更大量样本得不到满意的检测结果，则应及时考虑更换提取试剂盒。目前国内常用的Qiagen、Biog血浆核酸提取试剂盒核酸提取的得率都很不错，基本上能够满足绝大多数实验的要求。

图1 Qiagen关于cfDNA得率的数据图

图2 Biog血浆DNA提取试剂盒做血浆样本DNA提取，Q-bit测浓度无读数，PCR检测结果靶基因（CT 25左右）以及内参（CT 21左右）扩增曲线

3、血浆游离DNA提取试剂比较

质粒DNA回收实验：取1支1.5mL离心管，加入1mL健康人血浆样本，再加入40uL 0.5x10-8ug/uL的小鼠GAPDH质粒溶液，混匀。用BIOG血浆游离DNA提取试剂盒（中提）提取此1mL血浆样本DNA，40uL洗脱液洗脱，分别取提取的小鼠血浆总DNA和小鼠GAPDH质粒溶液，进行qPCR检测，检测CT值分别为CT1=31.25、CT2=31.38、CT3=30.95、CT4=30.86，表明血浆DNA提取回收效率较高，富集性能卓越。

与国际某知名品牌Q比较，取2支1.5mL离心管，1支加入200uL乙肝病人血浆样本，1支加入1mL乙肝病人血浆样本。按Q公司血浆提取说明书，提取200 uL血浆样本DNA，用BIOG血清血浆游离DNA提取试剂盒（中提）提取1mL血浆样本DNA，分别用40uL洗脱液洗脱，qPCR检测，BIOG血清血浆游离DNA提取试剂盒（中提）提取DNA检测CT值为32.08，而Q公司试剂盒提取的DNA检测CT值为34.32。可见，BIOG血清血浆游离DNA提取试剂盒（中提）具有卓越的富集提取性能，非常适合于一些靶基因含量较低的样本或较弱阳性的样本DNA提取。

图3 取1mL健康人血浆，加入40uL0.5x10^-8ug/uL的小鼠GAPDH质粒，用BIOG血清血浆游离DNA提取试剂盒（中提）提取，40uL洗脱液洗脱，与小鼠GAPDH质粒溶液一起做qPCR检测，CT值分别为CT1=31.25、CT2=31.38、CT3=30.95、 CT4=30.86，表明血浆DNA提取回收效率较高，富集性能卓越。

图2 BIOG血清血浆游离DNA提取试剂盒（中提）提取1mL乙肝病人血浆DNA，与Q公司试剂盒提取200uL血浆DNA qPCR检测结果，结果相差2个CT值以上，表明BIOG血清血浆游离DNA提取试剂盒（中提）具有卓越的血浆DNA富集提取性能。